El principal vector de la enfermedad de Chagas en países de la región del Cono Sur de América Latina es Triatoma infestans, y con la disminución de la población de esta especie debido a las acciones de control y vigilancia vectorial, surge el problema de reinfestación de las viviendas desde focos residuales o la invasión por especies no domésticas. En este contexto, especies nativas y secundarias como Triatoma sordida, adquieren importancia epidemiológica por la capacidad potencial de reemplazar el nicho ecológico de triatominos estrictamente domiciliarios como T. infestans después de su eliminación. En este estudio se analizaron los indicadores entomológicos: infestación, colonización, infección natural y fuente de alimentación de T. sordida capturados durante los años 2004 al 2007 en un área endémica del Paraguay, en fase de vigilancia entomológica. Se emplearon métodos moleculares para: i) la detección de Trypanosoma cruzi, ii) la caracterización de T. cruzi en linajes y sublinajes, y iii) detección de fuente de alimentación. Los resultados obtenidos demuestran el potencial rol de la especie T. sordida en la trasmisión de la enfermedad de Chagas en el Paraguay.