La mastitis bovina es la enfermedad más frecuente y costosa para la explotación lechera. La mayoría de los casos son causados por bacterias de los géneros Staphylococcus y Streptococcus siendo Streptococcus uberis el principal patógeno ambiental. La ineficacia de las medidas tradicionales para disminuir la tasa de infección ha dirigido la búsqueda al desarrollo de vacunas para complementar las medidas de control existentes. Las proteínas PauA y SUAM podrían ser empleadas como antígenos para el desarrollo de una subunidad vacunal. El presente trabajo estuvo dirigido a la obtención de mutantes de S. uberis deficientes en los genes pauA y sua mediante mutagénesis sitio-dirigida y la caracterización de dichas mutantes. Para la obtención de mutantes se empleó el uso combinado de dos tipos de vectores con replicación condicional derivados del pWV01: pORI280 y pG+host3. Fragmentos amplificados de los genes pauA y sua se clonaron en el plásmido pORI280 y se recuperaron en la cepa E. coli EC1000 RepA+. Los plásmidos recombinantes se emplearon para transformar la cepa S. uberis seleccionada y obtener mutantes. Se describe aquí una estrategia distinta en la obtención de mutantes en S. uberis.