En el presente trabajo se determinaron las propiedades ópticas de un microscopio de epifluorescencia a través del cálculo de su función de transferencia (PSF). La determinación se realizó en forma empírica utilizando microesferas fluorescentes patrón con un diámetro menor al poder de resolución de las lentes. Se observó que el sistema produce alteraciones, ya que las imágenes de las microesferas luego de atravesar las ópticas, exhiben una elongación axial. Dicho fenómeno fue evaluado en diferentes arreglos ópticos tridimensionales. Los cambios en la resolución axial encontrados fueron analizados por medio de la determinación del parámetro: ancho total a la mitad del máximo (FWHM) y geométricamente a través de la representación tridimensional de la señal fluorescente dispersada. Se encontró que el arreglo tridimensional provoca una aberración esférica, y se dedujo que las lentes están corregidas para trabajar sólo con especímenes delgados (arreglos bidimensionales). Para poder trabajar en microscopía 3D, se recurrió al proceso de desconvolución, utilizando la PSF como estimador de las imperfecciones del sistema.