La capacidad de algunas cepas de estafilococo coagulasa negativa para producir biofilm ha sido considerada por algunos autores como índice de virulencia y sirve para diferenciarlas de aquellas cepas contaminantes. El objetivo de este estudio fue determinar la relación entre la producción de biofilm y variables clínico-epidemiológicas, así como comparar la efectividad del medio de agar rojo congo para su diagnóstico con la empleada convencionalmente en nuestro laboratorio. Para ello se efectuó un estudio observacional, analítico y transversal en el periodo enero-diciembre del 2012 en el laboratorio de Microbiología del Hospital Provincial “Saturnino Lora”. El universo quedo constituido por 107 cepas de estafilococo coagulasa negativa que crecieron en muestras de catéter y hemocultivos de pacientes ingresados en las salas de Cuidados Intensivos, Cardiología, Nefrología y Cardiocentro; para la detección del biofilm se aplicó el medio de agar rojo congo y la prueba de mucus. Se concluye que la infección por estafilococo coagulasa negativa es frecuente en estos pacientes, que en ellos la edad avanzada, la presencia de estafilococo coagulasa negativa y especialmente la diabetes mellitus son factores a tener en cuenta. Se demostró que el medio de agar rojo congo por su sencillez, alta sensibilidad y especificidad puede sumarse al arsenal diagnóstico de nuestros laboratorios para la detección de biofilm.