Las técnicas serológicas constituyen una herramienta importante en la confirmación del diagnóstico de la enfermedad de Chagas inaparente y crónica. La prueba de hemaglutinación indirecta (HAI) es una de las técnicas serológicas más utilizadas para el tamizaje de la enfermedad de Chagas, una alternativa en la preparación de este método es el uso de eritrocitos humanos. En el presente estudio se ha preparado una prueba de hemaglutinación indirecta (HAI) utilizando eritrocitos humanos de grupos sanguíneos “O y A” para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas. El estudio realizado fue de tipo cuantitativo, experimental y descriptivo. En conclusión los resultados estadísticos demostraron que el grupo sanguíneo “O” Rh (+) positivo fue el más efectivo para la preparación de eritrocitos sensibilizados, porque demostró una sensibilidad del 94%, una especificad del 100% y un índice de concordancia del 0,91, siendo este grupo sanguíneo el mejor componente para la preparación de la prueba de HAI con diferencia a los grupos sanguíneos “A” Rh (+) positivo con sensibilidad de 100%, especificidad del 35% y “A” Rh (-) negativo con sensibilidad de 100%, especificidad de 10%.